С.В.Коробова¹, П.А.Стряхнин¹, И.Ю.Курбатова¹, И.А.Казаков², Н.А.Разваляева¹, И.В.Анкудинов¹, Т.В.Ганчо¹, В.А.Ледов¹, П.Г.Апарин¹

¹ФГБУ «ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Российская Федерация;
²ООО «Гритвак», Москва, Российская Федерация

Резюме: Гемофильная инфекция, вызываемая грамотрицательной бактерией Haemophilus influenzae серотипа b, – часто встречающееся на территории России заболевание, характеризующееся серьезными осложнениями и высокой летальностью у детей. Вакцинация – основное средство, предотвращающее распространение заболевания. Эпитопы, ответственные за образование протективных антител, располагаются на бактериальном капсульном полисахариде полирибозилрибитолфосфат (ПРФ), который является основным вакцинным антигеном.
Целью работы было определение оптимальных способов очистки ПРФ и методов оценки его качества. ПРФ получали многоступенчатой очисткой цетавлоновым методом. Для контроля качества продуктов на разных стадиях получения использованы методы высокоэффективной жидкостной хроматографии и ядерно-магнитного резонанса. Конечный продукт исследовали также методами, утвержденными в Государственной фармакопее Российской Федерации (ГФ РФ) ХIV пересмотра по показателям: содержание белка, нуклеиновых кислот, рибозы, специфическая активность, пирогенность, подлинность. Подтверждена структура, антигенные характеристики и серологическая активность ПРФ из H. influenzae серотипа b. Отработаны методы контроля технологической цепочки выделения полисахарида ПРФ. Получаемый продукт характеризуется высокой степенью очистки и сохранностью антигенных детерминант и может быть использован для конъюгации с белком-носителем для производства полноценного вакцинного препарата против гемофильной инфекции у детей. Показана возможность использования метода ядерно-магнитного резонанса для определения подлинности ПРФ, что позволяет заменить иммунохимический метод анализа, предлагаемый ГФ РФ XIV, на физико-химический.

Ключевые слова: Haemophilus influenzae тип b, полирибозилрибитолфосфат, высокоэффективная жидкостная хроматография, ядерно-магнитный резонанс, вакцина

Для цитирования: Коробова С.В., Стряхнин П.А., Курбатова И.Ю., Казаков И.А., Разваляева Н.А., Анкудинов И.В., Ганчо Т.В., Ледов В.А., Апарин П.Г. Получение и оценка качества полирибозил-рибитол-фосфата Haemophilus influenzae типа b – основного компонента вакцины против гемофильной инфекции. Бактериология. 2023; 8(3): 75-82.

DOI: 10.20953/2500-1027-2023-3-75-82

Читать полностью PDF-файл