М.А.Шкуратова¹, М.А.Марьин¹, М.М.Рогозин¹, А.К.Сурин¹, Л.В.Коломбет¹, В.В.Фирстова^1,2

¹ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, Оболенск, Московская область, Российская Федерация
²ФГБОУ ВО «Пущинский государственный естественно-научный институт», Пущино, Московская область, Российская Федерация

Резюме: В работе представлены результаты оптимизации метода получения шига-токсинов первого и второго типов (Stx1 и Stx2), продуцируемых некоторыми штаммами кишечной палочки, которые обозначают аббревиатурой STEC (Shiga toxin-producing Escherichia coli). Для экспрессии белка использовали штамм E. coli Rosetta (DE3) pLysS, который содержит дополнительные копии генов, редких для E. coli тРНК, что обеспечивает эффективную трансляцию Stx-белков. Культивирование проводили при пониженной температуре в среде для аутоиндукции ZYM-5052. В результате Stx-белки экспрессировались в цитоплазму в растворимой форме. После очистки белков методом аффинной хроматографии на колонке с никелевым сорбентом конечный выход рекомбинантных субъединиц шига-токсинов составлял приблизительно 1,7 мг/л для rStx1А; 1,9 мг/л для rStx2А; 2,5 мг/л для rStx1В и 2,7 мг/л для rStx2В. С использованием масс-спектрометрического анализа подтвердили идентичность полученных белков и определили наиболее часто повторяющиеся последовательности протеинов rStx1А, rStx2А, которые могут быть использованы при разработке базы для экспресс-идентификации шига-токсинов.

Ключевые слова: шига-токсин, масс-спектрометрия, рекомбинантные белки, идентификация

Для цитирования: Шкуратова М.А., Марьин М.А., Рогозин М.М., Сурин А.К., Коломбет Л.В., Фирстова В.В. Получение и масс-спектрометрическая характеристика рекомбинантных субъединиц шига-токсинов первого и второго типов (Stx1 и Stx2) Escherichia сoli. Бактериология. 2021; 6(4): 30-38.

DOI: 10.20953/2500-1027-2021-4-30-38

Читать полностью PDF-файл